附件：ALDH2基因多態(tài)性檢測(cè)試劑注冊(cè)審查指導(dǎo)原則（2025年第4號(hào)）.doc

ALDH2基因多態(tài)性檢測(cè)試劑
注冊(cè)審查指導(dǎo)原則

本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊(cè)申請(qǐng)人對(duì)ALDH2基因多態(tài)性檢測(cè)試劑注冊(cè)申報(bào)資料的準(zhǔn)備及撰寫，同時(shí)也為技術(shù)審評(píng)部門提供參考。

本指導(dǎo)原則是對(duì)ALDH2基因多態(tài)性檢測(cè)試劑的一般要求，申請(qǐng)人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用。若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學(xué)依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對(duì)注冊(cè)申報(bào)資料的內(nèi)容進(jìn)行充實(shí)和細(xì)化。

本指導(dǎo)原則是供注冊(cè)申請(qǐng)人和技術(shù)審評(píng)人員使用的指導(dǎo)性文件，但不包括審評(píng)審批所涉及的行政事項(xiàng)，亦不作為法規(guī)強(qiáng)制執(zhí)行，應(yīng)在遵循相關(guān)法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供詳細(xì)的研究資料和驗(yàn)證資料。

本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)體系以及當(dāng)前認(rèn)知水平下制定，隨著法規(guī)和標(biāo)準(zhǔn)的不斷完善，以及科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，相關(guān)內(nèi)容也將適時(shí)進(jìn)行調(diào)整。

一、適用范圍

本指導(dǎo)原則適用于采用熒光探針PCR法，對(duì)需要服用硝酸甘油進(jìn)行治療的心絞痛患者靜脈全血或口腔拭子等樣本DNA中的ALDH2基因多態(tài)性進(jìn)行體外定性檢測(cè)的試劑，用于硝酸甘油的用藥指導(dǎo)。通過對(duì)ALDH2*2（rs671，G1510A，Glu504Lys）多態(tài)性檢測(cè)，攜帶ALDH2*2等位基因的心絞痛患者盡可能改用其他急救藥物，避免硝酸甘油舌下含服無效。

本指導(dǎo)原則僅對(duì)用于硝酸甘油用藥指導(dǎo)的ALDH2基因多態(tài)性檢測(cè)試劑的相關(guān)要求進(jìn)行了說明，由于該基因還存在其他位點(diǎn)的多態(tài)性，且目前臨床意義不明確，可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面，申請(qǐng)人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)不適用部分進(jìn)行修訂或補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)和驗(yàn)證。

本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求是基于熒光探針PCR方法建立的，對(duì)于其他分子生物學(xué)檢測(cè)技術(shù)，可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標(biāo)不夠全面，申請(qǐng)人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對(duì)不適用部分進(jìn)行或補(bǔ)充其他的評(píng)價(jià)和驗(yàn)證，但需闡述不適用的理由，并驗(yàn)證替代方法的科學(xué)合理性。

本指導(dǎo)原則適用于ALDH2基因多態(tài)性檢測(cè)試劑注冊(cè)申請(qǐng)和變更注冊(cè)申請(qǐng)的情形。本指導(dǎo)原則針對(duì)相關(guān)產(chǎn)品注冊(cè)申報(bào)資料中的部分內(nèi)容進(jìn)行撰寫，其他未盡事宜應(yīng)當(dāng)符合相關(guān)法規(guī)要求。

二、注冊(cè)審查要點(diǎn)

（一）監(jiān)管信息

1.產(chǎn)品名稱及分類編碼

產(chǎn)品名稱應(yīng)符合《體外診斷試劑注冊(cè)與備案管理辦法》及相關(guān)法規(guī)的要求。根據(jù)《體外診斷試劑分類規(guī)則》，該產(chǎn)品按照第三類體外診斷試劑管理，分類編碼為6840。

2.其他信息還包括產(chǎn)品列表、關(guān)聯(lián)文件、申報(bào)前與監(jiān)管機(jī)構(gòu)的聯(lián)系情況和溝通記錄以及符合性聲明等文件。

（二）綜述資料

綜述資料主要包括概述、產(chǎn)品描述、預(yù)期用途、申報(bào)產(chǎn)品上市歷史及其他需說明的內(nèi)容。其中，產(chǎn)品描述應(yīng)詳述技術(shù)原理、產(chǎn)品主要研究結(jié)果的總結(jié)和評(píng)價(jià)、與同類和/或前代產(chǎn)品的比較等。與同類和/或前代產(chǎn)品的比較應(yīng)著重從技術(shù)原理、主要組成成分、預(yù)期用途、被測(cè)靶標(biāo)（基因多態(tài)性位點(diǎn)）、性能指標(biāo)、臨床應(yīng)用情況等方面詳細(xì)說明申報(bào)產(chǎn)品與已獲批準(zhǔn)的同類/前代產(chǎn)品之間的主要區(qū)別。預(yù)期用途應(yīng)詳述基因多態(tài)性位點(diǎn)與臨床適應(yīng)證關(guān)系，明確野生型、雜合型以及純合突變型的發(fā)生率等情況，特別是在中國(guó)人群的分布情況。

（三）非臨床資料

1.產(chǎn)品技術(shù)要求及檢驗(yàn)報(bào)告

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在原材料質(zhì)量和生產(chǎn)工藝穩(wěn)定的前提下，根據(jù)產(chǎn)品研制、前期評(píng)價(jià)等結(jié)果，依據(jù)相關(guān)文件資料，結(jié)合產(chǎn)品特性按照《醫(yī)療器械產(chǎn)品技術(shù)要求編寫指導(dǎo)原則》的要求編寫。該類產(chǎn)品作為第三類體外診斷試劑，應(yīng)當(dāng)以附錄形式明確主要原材料以及生產(chǎn)工藝要求。

第三類體外診斷試劑應(yīng)當(dāng)提供三個(gè)不同生產(chǎn)批次產(chǎn)品的檢驗(yàn)報(bào)告。目前已有適用的國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品發(fā)布，技術(shù)要求中應(yīng)體現(xiàn)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品的相關(guān)要求?？商峤簧暾?qǐng)人出具的自檢報(bào)告或委托有資質(zhì)的醫(yī)療器械檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)出具的檢驗(yàn)報(bào)告。

2.分析性能研究

注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)提交在符合質(zhì)量管理體系的環(huán)境下生產(chǎn)的試劑盒進(jìn)行的所有分析性能評(píng)估資料，包括具體試驗(yàn)方案、試驗(yàn)數(shù)據(jù)、統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果及結(jié)論等詳細(xì)資料。有關(guān)試驗(yàn)的背景信息也應(yīng)在申報(bào)資料中進(jìn)行描述，包括試驗(yàn)地點(diǎn)，采用的試劑名稱、規(guī)格和批號(hào)，儀器名稱和型號(hào)，樣本的背景信息（來源、樣本編號(hào)、樣本類型、采集及處理方式、基因型和濃度確認(rèn)方法及結(jié)果）等。分析性能評(píng)估用樣本一般應(yīng)為真實(shí)樣本，如聲稱多種適用樣本類型，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)不同樣本類型分別完成性能評(píng)估研究。

分析性能評(píng)估的試驗(yàn)方法可以參考國(guó)際或國(guó)內(nèi)有關(guān)體外診斷試劑性能評(píng)估的指導(dǎo)原則進(jìn)行，對(duì)于本類產(chǎn)品建議著重對(duì)以下分析性能進(jìn)行研究。

2.1樣本穩(wěn)定性及適用的樣本類型

應(yīng)充分考慮樣本采集/處理、運(yùn)輸、保存等各環(huán)節(jié)的影響，確定樣本的保存條件及保存時(shí)間并對(duì)樣本穩(wěn)定性進(jìn)行充分驗(yàn)證。如樣本提取后不立即進(jìn)行檢測(cè)，則還需對(duì)提取后的DNA穩(wěn)定性進(jìn)行充分研究。如聲稱多種適用樣本類型，注冊(cè)申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)不同樣本類型分別進(jìn)行樣本穩(wěn)定性研究。

對(duì)于全血樣本，如適用多種抗凝劑，建議通過同源比對(duì)研究對(duì)一定數(shù)量的臨床樣本驗(yàn)證各種抗凝劑的適用性。

2.2質(zhì)控品的賦值

描述質(zhì)控品的賦值過程，并提交三批產(chǎn)品的賦值研究資料。

2.3準(zhǔn)確度

可通過申報(bào)產(chǎn)品與測(cè)序結(jié)果或已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行方法學(xué)比對(duì)研究，評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的準(zhǔn)確度，樣本應(yīng)由若干份臨床樣本組成，樣本類型應(yīng)與產(chǎn)品適用范圍一致，樣本應(yīng)涵蓋所有檢測(cè)位點(diǎn)的野生型、雜合型和純合突變型。

2.4精密度

精密度評(píng)價(jià)應(yīng)采用臨床樣本進(jìn)行研究，樣本應(yīng)至少涵蓋雜合突變型。試驗(yàn)操作應(yīng)按照說明書執(zhí)行，需包含核酸提取/純化等樣本處理步驟。

精密度評(píng)價(jià)需滿足如下要求：

2.4.1對(duì)可能影響檢測(cè)精密度的主要因素進(jìn)行驗(yàn)證，除檢測(cè)試劑（包括核酸提取/純化組分）本身外，還包括儀器、操作者、地點(diǎn)、時(shí)間、檢測(cè)輪次、試劑批次等。

2.4.2設(shè)定合理的精密度評(píng)價(jià)周期，并對(duì)批內(nèi)/批間、日內(nèi)/日間、不同操作者間和不同實(shí)驗(yàn)室間的精密度進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。

2.4.3用于精密度評(píng)價(jià)的臨床樣本至少設(shè)置檢出限附近濃度和中/高濃度水平，檢測(cè)結(jié)果應(yīng)與預(yù)期結(jié)果一致。

2.4.4可結(jié)合產(chǎn)品的特點(diǎn)，對(duì)精密度指標(biāo)評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)做出合理要求，如CV值。

2.5檢出限和檢測(cè)上限

2.5.1檢出限和檢測(cè)上限的建立

ALDH2基因多態(tài)性檢測(cè)試劑的檢出限為：在滿足一定的檢測(cè)準(zhǔn)確性和精密度的條件下，能夠檢出目標(biāo)基因的人基因組DNA最低濃度。

可采用梯度濃度的人基因組DNA樣本進(jìn)行多次重復(fù)檢測(cè)，確定95%檢出率水平下的人基因組DNA最低濃度，即為檢出限。系列稀釋度應(yīng)能夠覆蓋大部分檢出概率區(qū)間（0～100%），可根據(jù)各濃度梯度檢測(cè)結(jié)果直接判定，也可通過適當(dāng)?shù)哪Ｐ停ㄈ鏟robit分析）和其他分析方法計(jì)算申報(bào)產(chǎn)品在設(shè)定概率下的檢出限，一般在該檢測(cè)濃度下應(yīng)具有95%的檢出率。

同時(shí)，申請(qǐng)人亦應(yīng)評(píng)價(jià)ALDH2基因多態(tài)性試劑可準(zhǔn)確檢出的人基因組DNA濃度上限，即適當(dāng)檢出率水平下的人基因組DNA最高濃度。

應(yīng)采用臨床樣本進(jìn)行檢出限及檢測(cè)上限研究，至少包含雜合型樣本。

2.5.2檢出限的驗(yàn)證

選取與建立不同的臨床樣本對(duì)聲稱的野生型、純合突變型和雜合型樣本進(jìn)行驗(yàn)證，建議對(duì)檢出限附近濃度水平的樣本進(jìn)行至少20次的重復(fù)檢測(cè)，應(yīng)滿足95%檢出率要求。

2.6 分析特異性

2.6.1干擾研究

可通過在臨床樣本中添加干擾物質(zhì)的方式，評(píng)價(jià)添加前后干擾物質(zhì)對(duì)靶基因檢測(cè)的影響。建議在每種干擾物質(zhì)的潛在最大濃度（“最差條件”）條件下進(jìn)行評(píng)價(jià)，如有干擾，應(yīng)確定不產(chǎn)生干擾的最高濃度。對(duì)于口腔拭子樣本，也可直接采集暴露于干擾因素后的受試者樣本，進(jìn)行干擾試驗(yàn)評(píng)價(jià)，如有干擾，在評(píng)估不影響臨床使用的前提下，應(yīng)在說明書檢驗(yàn)方法局限性中予以明確。

應(yīng)針對(duì)可能的內(nèi)源和外源性干擾物進(jìn)行干擾試驗(yàn)研究。干擾物的選擇與所用樣本類型有關(guān)，對(duì)于全血樣本，內(nèi)源性干擾物質(zhì)應(yīng)包括血紅蛋白、甘油三酯、膽紅素、白蛋白等，外源性干擾物質(zhì)應(yīng)包括抗凝劑、乙醇、乙醛、治療藥物等，對(duì)于治療藥物，建議選擇β受體阻滯劑、硝酸甘油、其他硝酸酯類藥物、鈣通道阻滯劑藥物、抗血小板藥物（如：阿司匹林、氯吡格雷或替格瑞洛）、調(diào)脂藥物（如：他汀類）等可能存在潛在干擾的藥物進(jìn)行充分研究。對(duì)于口腔拭子樣本，干擾物需考慮血液、唾液、口腔定植菌以及口腔可能接觸到的抗菌漱口液、牙膏、食物、藥物（如：硝酸甘油、口腔噴霧劑）、煙草等。

2.6.2交叉反應(yīng)

應(yīng)對(duì)與靶基因序列相近或具有同源性，易引起交叉反應(yīng)的基因序列（如：ALDH1、ALDH5以及ALDH2基因中除檢測(cè)靶標(biāo)外的其他突變位點(diǎn)）進(jìn)行交叉反應(yīng)研究。

試驗(yàn)方案需明確交叉樣本的制備方法、核酸序列確認(rèn)方式及結(jié)果，并提交詳細(xì)的研究資料。

2.7核酸提取/純化性能

在進(jìn)行核酸檢測(cè)之前，建議有核酸提取/純化步驟。對(duì)配合使用的所有核酸提取試劑進(jìn)行提取核酸純度、濃度、提取效率的研究，必要時(shí)與質(zhì)量較好的核酸提取試劑進(jìn)行平行比對(duì)研究。

若產(chǎn)品適用兩種或以上核酸提取試劑，則每一種核酸提取試劑均需配合檢測(cè)試劑進(jìn)行精密度、檢出限和抗干擾的驗(yàn)證。

2.8企業(yè)參考品驗(yàn)證

根據(jù)主要原材料研究資料中的企業(yè)參考品設(shè)置情況，采用三批產(chǎn)品對(duì)企業(yè)參考品進(jìn)行檢驗(yàn)并提供詳細(xì)的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

2.9反應(yīng)體系研究

2.9.1樣本采集和處理

請(qǐng)?jiān)斒鰳颖镜牟杉疤幚矸绞?，明確樣本的保存介質(zhì)。

對(duì)于口腔拭子樣本，還應(yīng)提供采樣拭子及樣本保存介質(zhì)（如：樣本保存液）的選擇研究，明確對(duì)拭子頭和拭子桿的材質(zhì)要求、保存液或裂解液的成分、濃度、使用量的要求等。配套的不同保存液或裂解液需驗(yàn)證檢出限和重復(fù)性。

2.9.2反應(yīng)體系

應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品特性，提供反應(yīng)體系的確定研究資料。包括但不限于核酸提取用的樣本體積、洗脫體積和PCR反應(yīng)中樣本和試劑的加樣體積、各種酶濃度、引物/探針濃度、dNTP濃度、陽離子濃度及反應(yīng)條件（如：溫度、時(shí)間、循環(huán)數(shù)）等。

如有多個(gè)適用機(jī)型，需提供不同適用機(jī)型基線和閾值的確定資料。不同適用機(jī)型的反應(yīng)條件如果有差異應(yīng)分別詳述，并提交驗(yàn)證資料。

3.穩(wěn)定性研究

申報(bào)試劑的穩(wěn)定性主要包括實(shí)時(shí)穩(wěn)定性、開瓶穩(wěn)定性、運(yùn)輸穩(wěn)定性、機(jī)載穩(wěn)定性（如適用）及凍融次數(shù)限制等研究，申請(qǐng)人可根據(jù)實(shí)際需要選擇合理的穩(wěn)定性研究方案。穩(wěn)定性研究資料應(yīng)包括具體的實(shí)施方案、詳細(xì)的研究數(shù)據(jù)、分析結(jié)果以及結(jié)論。對(duì)于實(shí)時(shí)穩(wěn)定性研究，應(yīng)提供至少三批產(chǎn)品在實(shí)際儲(chǔ)存條件下保存至成品有效期后的研究資料。

4.陽性判斷值研究

對(duì)于此類試劑，陽性判斷值即為能夠獲得理想的檢測(cè)準(zhǔn)確性的臨界值（Cut-off）。應(yīng)納入涵蓋野生型、純合突變型和雜合型的臨床樣本，采用受試者工作特征（ROC）曲線的方式進(jìn)行研究，亦可采用其他科學(xué)合理的方法進(jìn)行陽性判斷值研究。相關(guān)資料中應(yīng)詳述試驗(yàn)方案、樣本數(shù)量、樣本入組標(biāo)準(zhǔn)、樣本背景信息（來源、可溯源編號(hào)、性別、年齡等）及試驗(yàn)結(jié)果等。

應(yīng)針對(duì)不同樣本類型（如有）分別進(jìn)行陽性判斷值研究，明確是否有差異。

如果試劑判讀存在灰區(qū)，應(yīng)解釋說明灰區(qū)范圍的確定方法。

5.其他資料

5.1主要原材料研究資料

該類產(chǎn)品的主要原材料包括引物、探針、酶、dNTP、核酸分離/純化組分（如有）、質(zhì)控品、參考品等。應(yīng)提供主要原材料的選擇、來源、制備過程、質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)等相關(guān)研究資料。如主要原材料為企業(yè)自制，應(yīng)提供詳細(xì)的制備過程及支持性資料；如主要原材料源于外購(gòu)，應(yīng)提供資料包括：選擇該原材料的依據(jù)及對(duì)比篩選試驗(yàn)資料、生產(chǎn)商提供的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)、出廠檢驗(yàn)報(bào)告，以及該原材料到貨后的質(zhì)量檢驗(yàn)資料。

5.1.1引物和探針：應(yīng)詳述引物、探針的設(shè)計(jì)原則，提供引物探針序列、靶基因序列及兩者的對(duì)應(yīng)情況。建議設(shè)計(jì)兩套或多套引物探針以供篩選，針對(duì)待測(cè)位點(diǎn)的檢測(cè)靈敏度和特異性等進(jìn)行評(píng)價(jià)，選擇最佳引物探針組合，并提交詳細(xì)的篩選研究數(shù)據(jù)。同時(shí)應(yīng)針對(duì)引物、探針核酸序列及檢測(cè)靶序列進(jìn)行同源性比對(duì)，如有同源序列應(yīng)著重評(píng)價(jià)是否會(huì)有交叉反應(yīng)。

申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)選定的引物、探針原材料進(jìn)行質(zhì)量評(píng)價(jià)，一般包括：序列準(zhǔn)確度、分子量、純度、濃度、探針熒光標(biāo)記的準(zhǔn)確性以及功能性試驗(yàn)等，并依據(jù)評(píng)價(jià)結(jié)果建立合理的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

5.1.2脫氧三磷酸核苷（dNTP）：包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP或dUTP；應(yīng)提交對(duì)其純度、濃度以及功能性試驗(yàn)等資料，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

5.1.3酶：可能涉及的酶包括DNA聚合酶、尿嘧啶DNA糖基化酶等，應(yīng)分別對(duì)酶活性、熱穩(wěn)定性、功能性試驗(yàn)等進(jìn)行評(píng)價(jià)和驗(yàn)證，并確定質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

DNA聚合酶應(yīng)具有DNA聚合酶活性，無核酸內(nèi)切酶活性，具熱穩(wěn)定性。UDG/UNG應(yīng)具有水解尿嘧啶糖苷鍵的活性，無核酸外切酶及核酸內(nèi)切酶活性。

5.1.4質(zhì)控品：ALDH2基因多態(tài)性檢測(cè)試劑的質(zhì)控品可分別設(shè)置野生型、雜合型及純合突變型DNA樣品，同時(shí)設(shè)置不含待測(cè)靶序列的空白質(zhì)控品用于交叉污染的質(zhì)控；亦可直接采用待測(cè)位點(diǎn)的雜合型DNA樣品及空白質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)量控制。

對(duì)于此類產(chǎn)品，一般情況下，反應(yīng)體系中野生型序列和突變型序列均有陽性反應(yīng)，可以對(duì)管內(nèi)抑制導(dǎo)致的假陰性結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量控制，則試劑盒中可不另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)對(duì)照；否則，應(yīng)另外設(shè)置內(nèi)標(biāo)對(duì)照。

質(zhì)控體系應(yīng)能夠?qū)z測(cè)全過程進(jìn)行有效的質(zhì)量控制，包括試劑及儀器性能、可能的擴(kuò)增反應(yīng)抑制物（管內(nèi)抑制）、交叉污染等因素造成的假陰性或假陽性結(jié)果。質(zhì)控品可采用質(zhì)粒或臨床樣本的核酸提取液等?？瞻踪|(zhì)控品應(yīng)參與樣本核酸的平行提取。申請(qǐng)人應(yīng)針對(duì)質(zhì)控品原料來源、選擇、制備、定值過程等提供詳細(xì)的研究資料，并對(duì)質(zhì)控品的檢測(cè)結(jié)果做出明確的范圍要求。

5.1.5 核酸提取/純化試劑（如有）：應(yīng)提供試劑的主要組成、原理介紹及相關(guān)的篩選及驗(yàn)證資料。

5.1.6企業(yè)參考品：

該類產(chǎn)品的企業(yè)參考品一般包括準(zhǔn)確性參考品、特異性參考品、檢出限參考品和精密度參考品。應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品性能驗(yàn)證的實(shí)際需要設(shè)置企業(yè)參考品。

應(yīng)提交企業(yè)參考品的原料來源、選擇、制備、濃度及基因序列確認(rèn)方法或試劑等相關(guān)研究資料。企業(yè)參考品的設(shè)置建議如下：

準(zhǔn)確性參考品：可采用臨床樣本進(jìn)行設(shè)置，樣本類型與待測(cè)樣本一致。應(yīng)包含野生型、雜合型和純合突變型樣本。

特異性參考品：應(yīng)考慮檢測(cè)特異性的評(píng)價(jià)，適當(dāng)納入同源序列交叉反應(yīng)樣本、干擾樣本等。

檢出限參考品：可選擇檢出限或略高于檢出限濃度的臨床樣本，需覆蓋試劑盒聲稱的基因型。

精密度參考品：建議包括高、低兩個(gè)濃度水平，其中一個(gè)濃度應(yīng)為檢出限附近的濃度。至少包含雜合型臨床樣本。

5.2生產(chǎn)工藝研究資料

可結(jié)合工藝流程圖描述生產(chǎn)工藝過程。生產(chǎn)過程應(yīng)對(duì)關(guān)鍵參數(shù)進(jìn)行有效控制，明確關(guān)鍵工藝質(zhì)控步驟，并詳細(xì)說明該步驟的質(zhì)控方法及質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)。并提交主要生產(chǎn)工藝的確定及優(yōu)化研究資料。

（四）臨床評(píng)價(jià)資料

臨床試驗(yàn)的開展、方案的制定以及報(bào)告的撰寫等均應(yīng)符合相關(guān)法規(guī)及《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，如相關(guān)法規(guī)、文件有更新，臨床試驗(yàn)應(yīng)符合更新后的要求。

1.臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)

應(yīng)選擇不少于3家（含3家）已備案的臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)，按照相關(guān)法規(guī)、指導(dǎo)原則的要求開展臨床試驗(yàn)。申請(qǐng)人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特點(diǎn)及預(yù)期用途，綜合流行病學(xué)背景等因素選擇臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)。臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)具有分子生物學(xué)方法檢測(cè)的優(yōu)勢(shì)，實(shí)驗(yàn)操作人員應(yīng)有足夠的時(shí)間熟悉檢測(cè)系統(tǒng)的各環(huán)節(jié)，熟悉臨床試驗(yàn)方案。

2.臨床試驗(yàn)方法

有已上市同類產(chǎn)品的，建議申請(qǐng)人選擇境內(nèi)已批準(zhǔn)上市的同類產(chǎn)品作為對(duì)比試劑，采用試驗(yàn)體外診斷試劑與之進(jìn)行對(duì)比試驗(yàn)研究，評(píng)價(jià)申報(bào)產(chǎn)品的臨床性能。對(duì)比試劑的選擇應(yīng)從預(yù)期用途、樣本要求、檢測(cè)性能等方面，確認(rèn)其與申報(bào)產(chǎn)品具有較好的可比性。

如無已上市同類產(chǎn)品的，可以選擇公認(rèn)的參考方法（如Sanger測(cè)序法）作為對(duì)比方法。

3.受試者選擇和樣本類型

3.1受試者選擇

受試者應(yīng)為需服用硝酸甘油進(jìn)行治療的，具有心絞痛癥狀的冠心病、心力衰竭等疾病的患者。

3.2 樣本類型

適用的樣本類型一般為靜脈抗凝全血，應(yīng)采用相同樣本類型的已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究。

如產(chǎn)品同時(shí)適用于口腔拭子，對(duì)于口腔拭子樣本類型的評(píng)價(jià)，可與相同樣本類型的已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究，也可與靜脈全血樣本類型的已上市同類產(chǎn)品進(jìn)行比較研究；也可采用與申報(bào)產(chǎn)品的靜脈全血進(jìn)行同源比對(duì)的方式進(jìn)行評(píng)價(jià)。

臨床試驗(yàn)中應(yīng)為臨床原始樣本，不應(yīng)直接采用提取的基因組DNA進(jìn)行試驗(yàn)。臨床樣本的采集、處理、保存和提取等應(yīng)同時(shí)滿足申報(bào)產(chǎn)品說明書以及對(duì)比試劑說明書（如適用）的相關(guān)要求。

4.臨床試驗(yàn)樣本量

臨床試驗(yàn)樣本量應(yīng)滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求，可采用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計(jì)學(xué)方法進(jìn)行估算。根據(jù)相應(yīng)臨床試驗(yàn)設(shè)計(jì)，本臨床試驗(yàn)可依據(jù)申報(bào)產(chǎn)品相對(duì)于對(duì)比試劑的突變型、野生型符合率分別估算最低突變型、野生型樣本例數(shù)。

與對(duì)比方法進(jìn)行的比較研究中，臨床樣本量的估算建議采用單組目標(biāo)值法進(jìn)行計(jì)算，突變型/野生型符合率的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)（P0）建議不低于95%。

公式中，n為樣本量；Z1-α/2、Z1-β為顯著性水平和把握度的標(biāo)準(zhǔn)正態(tài)分布的分?jǐn)?shù)位，P0為評(píng)價(jià)指標(biāo)的臨床可接受標(biāo)準(zhǔn)，PT為申報(bào)產(chǎn)品評(píng)價(jià)指標(biāo)預(yù)期值。

臨床試驗(yàn)總體樣本量確定時(shí)應(yīng)在上述突變型、野生型樣本最低樣本量估算的基礎(chǔ)上，同時(shí)考慮其他可能造成受試者脫落的情況以及可能需要納入的干擾樣本、交叉反應(yīng)樣本等情況適當(dāng)增加入組樣本量。應(yīng)注意雜合型和純合型基因型均應(yīng)有一定例數(shù)。

如申報(bào)產(chǎn)品適用于不同樣本類型（如：靜脈抗凝全血、口腔拭子），臨床試驗(yàn)應(yīng)以靜脈全血樣本類型為主按照上述樣本量估算要求完成臨床評(píng)價(jià)，針對(duì)口腔拭子樣本類型，突變型和野生型樣本量應(yīng)分別滿足統(tǒng)計(jì)學(xué)要求。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

應(yīng)對(duì)入組人群進(jìn)行人口學(xué)分析，包括年齡、性別和臨床診斷背景信息等。

總結(jié)野生型、雜合型和純合突變型的例數(shù)，以3×3表分別總結(jié)兩種試劑的定性檢測(cè)結(jié)果，并分別計(jì)算各基因型的符合率、總體符合率及其95%置信區(qū)間，對(duì)定性結(jié)果進(jìn)行kappa檢驗(yàn)，以評(píng)價(jià)兩種試劑檢測(cè)結(jié)果的一致性。同時(shí)應(yīng)將雜合型和純合型匯總統(tǒng)計(jì)，并計(jì)算相應(yīng)的95%置信區(qū)間。

在數(shù)據(jù)收集過程中，對(duì)于兩種試劑檢測(cè)結(jié)果不一致的樣本，應(yīng)采用合理方法進(jìn)行復(fù)核，并對(duì)差異原因進(jìn)行分析。如無需復(fù)核，應(yīng)說明理由。

6.倫理學(xué)要求

臨床試驗(yàn)必須符合赫爾辛基宣言的倫理學(xué)準(zhǔn)則。研究者應(yīng)考慮臨床試驗(yàn)用樣本的獲得和試驗(yàn)結(jié)果對(duì)受試者的風(fēng)險(xiǎn)，提請(qǐng)倫理委員會(huì)審查，并獲得倫理委員會(huì)的同意。注冊(cè)申報(bào)時(shí)應(yīng)提交倫理委員會(huì)的審查意見。

7.臨床試驗(yàn)方案

各臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)應(yīng)執(zhí)行同一臨床試驗(yàn)方案，且保證在整個(gè)臨床試驗(yàn)過程中遵循預(yù)定的方案，不可隨意改動(dòng)。整個(gè)試驗(yàn)過程應(yīng)在臨床試驗(yàn)機(jī)構(gòu)的實(shí)驗(yàn)室內(nèi)并由本實(shí)驗(yàn)室的技術(shù)人員操作完成，申報(bào)單位的技術(shù)人員除進(jìn)行必要的技術(shù)指導(dǎo)外，不得隨意干涉實(shí)驗(yàn)進(jìn)程。

試驗(yàn)方案應(yīng)確定嚴(yán)格的入選/排除標(biāo)準(zhǔn)，任何已入選的樣本被剔除出臨床試驗(yàn)都應(yīng)記錄在案并明確說明原因。在試驗(yàn)操作過程和結(jié)果判定時(shí)應(yīng)采用盲法以保證試驗(yàn)結(jié)果的客觀性。

8.質(zhì)量控制

臨床試驗(yàn)開始前，建議進(jìn)行臨床試驗(yàn)方案的培訓(xùn)，以熟悉并掌握相關(guān)試驗(yàn)方法的操作、儀器、技術(shù)性能等，最大限度控制試驗(yàn)誤差。整個(gè)試驗(yàn)過程都應(yīng)處于有效的質(zhì)量控制下，最大限度保證試驗(yàn)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性及可重復(fù)性。

9.臨床試驗(yàn)小結(jié)與報(bào)告的撰寫

根據(jù)《醫(yī)療器械臨床試驗(yàn)質(zhì)量管理規(guī)范》《體外診斷試劑臨床試驗(yàn)技術(shù)指導(dǎo)原則》的要求，撰寫臨床試驗(yàn)小結(jié)與報(bào)告，并且滿足簽章等要求。臨床試驗(yàn)報(bào)告應(yīng)該對(duì)試驗(yàn)的整體設(shè)計(jì)及各個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)給予清晰、完整的闡述，應(yīng)該對(duì)整個(gè)臨床試驗(yàn)實(shí)施過程、結(jié)果分析、結(jié)論等進(jìn)行條理分明的描述，并應(yīng)包括必要的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)和統(tǒng)計(jì)分析方法。

（五）產(chǎn)品說明書

產(chǎn)品說明書格式應(yīng)符合《體外診斷試劑說明書編寫指導(dǎo)原則》的要求。產(chǎn)品說明書的技術(shù)內(nèi)容應(yīng)與注冊(cè)申報(bào)資料中的相關(guān)研究結(jié)果保持一致，如某些內(nèi)容引用自參考文獻(xiàn)，應(yīng)以規(guī)范格式對(duì)此內(nèi)容進(jìn)行標(biāo)注，并單獨(dú)注明文獻(xiàn)的相關(guān)信息。ALDH2基因多態(tài)性檢測(cè)試劑說明書編寫應(yīng)重點(diǎn)關(guān)注以下內(nèi)容。

1.【預(yù)期用途】應(yīng)至少包括以下幾部分內(nèi)容：

1.1本產(chǎn)品用于體外定性檢測(cè)人體xx樣本中的xx基因位點(diǎn)的多態(tài)性。

1.2介紹被測(cè)靶標(biāo)（基因多態(tài)性位點(diǎn)），規(guī)范表述多態(tài)性位點(diǎn)，說明基因位點(diǎn)與臨床適用癥的關(guān)系，明確野生型、雜合型和純合突變型的臨床發(fā)生頻率。

1.3明確本產(chǎn)品檢測(cè)結(jié)果僅供臨床參考，不應(yīng)作為患者是否用藥的唯一依據(jù)，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合患者病情、療效及其他實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)等對(duì)本產(chǎn)品的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行綜合判斷。

2.【檢驗(yàn)原理】

2.1對(duì)試劑盒的被測(cè)靶標(biāo)進(jìn)行詳細(xì)描述（基因位置、多態(tài)性位點(diǎn)及相關(guān)特征等），對(duì)試劑盒所用探針、引物、多態(tài)性的判定方式等進(jìn)行詳細(xì)的介紹；對(duì)不同樣本反應(yīng)管組合、質(zhì)控品設(shè)置及熒光信號(hào)檢測(cè)原理等進(jìn)行介紹。

2.2如反應(yīng)體系中添加了相關(guān)的防污染組分（如UNG酶），也應(yīng)對(duì)其作用機(jī)理進(jìn)行簡(jiǎn)要介紹。

3.【主要組成成分】

明確試劑盒中各組分及具體成分。明確需要但未提供的材料等信息。

4.【樣本要求】

應(yīng)明確樣本采集、處理、保存等各環(huán)節(jié)要求，說明樣本保存條件及期限等。冷藏/冷凍樣本檢測(cè)前是否需要恢復(fù)至室溫，凍融次數(shù)的限制等。

5.【檢驗(yàn)方法】

詳細(xì)說明試驗(yàn)操作的各個(gè)步驟，包括：

5.1試驗(yàn)條件：必要時(shí)，應(yīng)明確實(shí)驗(yàn)室分區(qū)、試驗(yàn)環(huán)境的溫度、濕度和空調(diào)氣流方向控制等注意事項(xiàng)。

5.2試劑配制方法和注意事項(xiàng)。

5.3詳述核酸提取純化的條件、步驟及注意事項(xiàng)（如適用），對(duì)核酸提取純化環(huán)節(jié)進(jìn)行合理的質(zhì)量控制，明確提取核酸的濃度純度等質(zhì)量要求。

5.4擴(kuò)增反應(yīng)前準(zhǔn)備：加樣體積、順序等。

5.5 PCR各階段的溫度、時(shí)間設(shè)置、循環(huán)數(shù)設(shè)置或相應(yīng)的自動(dòng)化檢測(cè)程序及相關(guān)注意事項(xiàng)。

5.6儀器設(shè)置（如適用）：特殊參數(shù)、探針的熒光素標(biāo)記情況、對(duì)待測(cè)多態(tài)性及其他質(zhì)控品的熒光通道選擇等。

6.【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

結(jié)合質(zhì)控品、樣本管檢測(cè)結(jié)果以及多態(tài)性類型與硝酸甘油表型之間的關(guān)系，可以用列表形式詳述所有可能出現(xiàn)的結(jié)果及相應(yīng)的解釋。

7.【檢驗(yàn)方法的局限性】

7.1有關(guān)假陰性結(jié)果的可能性分析。

7.1.1不合理的樣本采集、運(yùn)送及處理或核酸過度降解均有可能導(dǎo)致檢測(cè)失敗。

7.1.2未經(jīng)驗(yàn)證的其他干擾或PCR抑制因子等可能會(huì)導(dǎo)致假陰性結(jié)果（如有）。

7.1.3樣本類型如包含口腔拭子，需說明吸煙、進(jìn)食等行為可能對(duì)檢測(cè)結(jié)果的影響。

8.【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

簡(jiǎn)述以下性能指標(biāo)：

8.1國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)品和企業(yè)參考品的符合率。

8.2對(duì)準(zhǔn)確度、精密度的研究情況進(jìn)行總結(jié)。

8.3檢出限和檢測(cè)上限：簡(jiǎn)要介紹評(píng)價(jià)方法、所用樣本情況以及評(píng)價(jià)結(jié)果。

8.4分析特異性

8.5.1干擾試驗(yàn)：說明驗(yàn)證的干擾物質(zhì)種類及有/無干擾反應(yīng)的濃度水平。

8.5.2 交叉反應(yīng)：說明驗(yàn)證的交叉物質(zhì)，及有/無交叉反應(yīng)的濃度水平。

8.6臨床試驗(yàn)：介紹試驗(yàn)方法、受試者及樣本、試驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論等。

9.【注意事項(xiàng)】應(yīng)至少包括以下內(nèi)容：

9.1本產(chǎn)品僅用于體外診斷。

9.2如該產(chǎn)品含有人源或動(dòng)物源性物質(zhì)，應(yīng)給出具有潛在感染性的警告。

9.3臨床實(shí)驗(yàn)室應(yīng)嚴(yán)格按照《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室管理辦法》等有關(guān)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室、臨床基因擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)室的管理規(guī)范執(zhí)行。

9.4避免實(shí)驗(yàn)室污染的措施。

（六）質(zhì)量管理體系文件

申請(qǐng)人應(yīng)當(dāng)在申請(qǐng)注冊(cè)時(shí)提交與產(chǎn)品研制、生產(chǎn)有關(guān)的質(zhì)量管理體系相關(guān)資料。詳述產(chǎn)品的生產(chǎn)過程，提供生產(chǎn)工藝流程圖。明確申報(bào)產(chǎn)品反應(yīng)及檢測(cè)原理和過程，標(biāo)明主要控制點(diǎn)與項(xiàng)目及主要原材料、采購(gòu)件的來源及質(zhì)量控制方法。

如適用，應(yīng)當(dāng)提供擬核查產(chǎn)品與既往已通過核查產(chǎn)品在生產(chǎn)條件、生產(chǎn)工藝等方面的對(duì)比說明。

三、參考文獻(xiàn)

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